肉，蛋，饲料抗生素残留检测试剂盒

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试剂盒介绍：
EXPLORER 是一种检测原料肉和蛋里面抑制剂和抗生素残留的试剂。这是一种快速简单的方法，
可以在4 个小时内检测到样品里面的抗生素药物是否**标（**过欧盟规定MRL）。

原理：
EXPLORER 的原理是基于抑制微生物生长。试剂盒是以96 孔板的形式来设计，每个小孔里面都
含有均匀扩散了geobacillus stearothermophilus 孢子的琼脂培养基，同时还含有氧化还原指示剂。
当试剂孔在 65℃培养时，孢子开始被激活，并且生长繁殖，细胞的生长改变了培养基里面的氧化
还原潜力，使琼脂的颜色从蓝色变成橘红色（橙色）。如果样品内的抗生素浓度**过了试剂盒的检
测限，则孢子就不会被激活，细菌就不会生长繁殖，琼脂的颜色不会改变。

试剂盒组成：
可独立拆分的检测板--96个检测--480个检测
微孔板--1--5
粘胶纸--2--10
产品规格书--有--有

稳定性和储藏：
试剂盒要存放在 4-12℃的环境中，并且避光保存。在较佳环境保存可以存放6 个月，具体的保质
期在试剂板的上面。

附加设备（试剂盒不包括的）：
微量加样枪
恒温器（FX INCUBATOR，由ZEU 公司提供），或者水浴和恒温箱（可以调到65℃）
磁力搅拌机
分析天平
肝样稀释溶液-EX（稀释肝样的溶液）（产品订货号：ZE/EX/SOLD8）
肉和肝的阴性控制样（无抗生素标准样品）（产品订货号：ZE/EX/CN1/1，ZE/EX/CN1/5）
蛋的阴性控制样（无抗生素标准样）（产品订货号：ZE/EX/CN2）
饲料阴性控制样：PBST（看样品准备过程中有列出组成成分）
阳性控制样 —— 冻干的青霉素 G（可选，ZEU 公司提供，货号ZE/PG5）
 
安全：
在使用本试剂时推荐使用良好实验室操作规范，MSDS 可以找当地的经销商或者ZEU 公司；

注意：
◆ 阴性控制样是用来决定每次检测时的较佳培养时间，在附加材料里面查看肉、肝、肾、蛋的阴
性控制参数。PBST 是饲料的阴性控制样（在样品准备过程中看组成）；
◆ 推荐使用阳性控制样（高浓度抗生素残留的样品）；
◆ 每次必须使用新的加样头；
◆ 肝样需要添加附加的溶液（看样品准备有介绍，或者联系供应商）；
◆ 切碎的肉，阉制的肉，以及烟熏肉等等因为他们本身的物理以及化学的一些特点会抑制本试剂
的微生物生长，这种抑制现象与肉里面的抗生素以及磺胺药物的残留无关；
◆ 样品收集后必须马上开始实验，在冷藏环境下不能**过24 小时，冷冻可以保持较长时间；
◆ 样品的添加量非常重要，所以必须矫正加样枪；
◆ 每一次必须使用新的加样头；
◆ 使用直径为1.5cm 的耐热塑料管或者玻璃管作为样品准备容器；
◆ 本检测试剂对任何抗生素和任何的抑制物（例如消毒剂和清洁剂）都特别的敏感，所以要避免
这些抑制物的污染；

样品准备
鲜肉样品准备：
1． 称取 3±0.5 克没有脂肪或者其他组织的一片瘦肉样品，剪成小碎片
2． 把瘦肉样品放入玻璃杯或者直径 1.5CM 的耐热塑料管中，密封
3． 在 100℃的水浴中加热3±0.5 分钟
4． 把试管浸在冷水中降温
5． 用镊子来挤压肉碎片，尽可能多的挤出肉汁
6． 把肉汁在 2000 转/分钟下离心3 分钟（推荐用eppendorf 离心机），取上清液。或者也用
0.45um 的滤膜过滤，取滤液
7． 加 100ul 的滤液或者离心后上清液到检测微孔开始实验
肝样品的准备：
1． 切取 10±0.5 克肝组织，切成碎片
2． 把样品放入玻璃杯或者直径 1.5CM 的耐热塑料管中，密封
3． 在 100℃的水浴中加热12±0.5 分钟
4． 把试管浸在冷水中降温
5． 把肉汁在 2000 转/分钟下离心3 分钟（推荐用eppendorf 离心机），取上清液；或者也用
0.45um 的滤膜过滤，取滤液
6． 取 200ul 的汁液，和100ul 的肝稀释液混合-EX( ZE/EX/SOLD8)；制备成待检液
7． 加 100ul 混合后待检液到检测微孔开始实验。
肾脏样品的准备：
1． 切取 5±0.5 克肾脏组织（连带皮和髓汁）
2． 把样品放入玻璃杯或者直径 1.5CM 的耐热塑料管中，密封
3． 在 100℃的水浴中加热4±0.5 分钟
4． 把试管浸在冷水中降温
5． 把肉汁在 2000 转/分钟下离心3 分钟（推荐用eppendorf 离心机），取上清液；或者也用
0.45um 的滤膜过滤，取滤液
6． 加 100ul 滤液或者上清液到检测微孔开始实验
饲料样品的准备：
1． 称取 1±0.1 克均匀的饲料样品，放入清洁的试管密封
2． 加 20ml 的预热后的PBST（大约40℃）
PBST（5 升）：45 克NaCl，80ml 浓度为0.5 摩尔的二溶液（K2HPO4），16.7ml
浓度为0.5 摩尔的二溶液(KH2PO4)，5ml 的吐温20，用K2HPO4 或者KH2PO4 调
节PH 到7.4。
3． 均质混合样品液 30 分钟，使用磁力搅拌器直到样品全部溶解。
4． 2000 转离心15 分钟，取上清液。或者可以使用0.45um 的滤膜过滤，取滤液。
5． 加 100ul 的滤液或者离心后上清液到检测孔开始实验。
蛋样品的准备：
1． 把蛋黄和蛋白都放进清洁的容器，然后拍打得到均匀的液体，不能有块状。
2． 用蒸馏水 1：4 稀释均匀的液体（1ml 蛋液+3ml 蒸馏水），装在玻璃杯或者是直径1.5CM 的
耐热塑料管中，密封。
3． 在 100℃的水浴中加热样品12±0.5 分钟
4． 用力搅拌样品 20-30 秒，避免样品凝结成块状，在室温冷却样品。
5． 加 100ul 的混合物到检测微孔开始实验

操作过程：
1． 先用刀切开所需要检测的小孔，从底部用力把切好的小孔**出微孔板架。虽然可以单个使用，
但是我们还是推荐一次使用8 个（刚好一条）。
2． 把带检测的试剂条上的铝薄纸撕去，每个小孔加100ul 的样品，同时做一个阴性对照样（加
100ul 的阴性控制样）。推荐使用自动加样枪，检查其他未使用的检测孔是否仍然密封完好，
没有使用的小孔必须马上放入袋子里面封好，以免小孔干结。
阴性
冲洗 3-4 次
扩散 培养 阳性
（65℃加热30 分钟） （65℃加热3hr-3hr30 分钟）
加 100ul 样品和阴性控制样在 590nm-650nm 之间读数
3． 用粘胶纸把加好样的小孔密封好，放入65℃的恒温器中培养30 分钟，使样品充分均匀扩散
开来。
4． 倒空扩散后的样品液，用蒸馏水冲洗样品孔，如果使用微量加样枪时每个孔需要加 300ul，
如果使用冲洗瓶则充满整个小孔。倒空所有的蒸馏水，并且在吸水纸上面吸去多余的水，这
样冲洗重复3-4 次。
5． 用粘胶纸密封检测孔，在65℃的恒温器中培养，直到阴性控制样孔变成橙色（橘黄色），大
概的培养时间是3h—3h30min。也可以查看产品规格书，得到准确的培养时间。
6． 结果说明
◆ 肉眼判读结果：观察小孔底部，蓝紫色为阳性结果，橙色-棕色为阴性结果。
◆ 酶标仪读数：分别在590nm 和650nm 读数，结果说明是用两个读数的差值来表示，如果阴性
控制样的读数差值（AN590nm-AN650nm）在0.15 和0.25 之外时，检测结果无效。样品的结
果如果大于阴性样品读数差值加0.15 的和时为判断为阳性。
阳性：AM590nm-AM650nm≥AN590nm-AN650nm+0.15
AM：样品的吸光度值
AN：阴性控制样品的吸光度值
注：上面的判读方式只适用于阴性控制样品的吸光度值差在 0.15-0.25 之间的情况。